Diese Fledermaus ist Thüringen bereits seit Jahrzehnten ausgestorben. Über Nordwest-Afrika über den ganzen europäischen Mittelmeerraum ist die Große Hufeisennase verbreitet.

Die einzige deutsche Wochenstube befindet sich in der Oberpfalz. Über eine zukünftige Verbreitung kann derzeit keine Aussage getroffen werden. Große Hufeisennasen besiedeln gerne warme Quartiere wie Dachräume. Im Süden Ihres Verbreitungsgebietes leben sie auch in Höhlen oder Bergwerkstollen.

Die Art bevorzugt strukturreiche Landschaften mit Laubwald, Weiden, Hecken und Obstwiesen. Wo Weidetiere gehalten werden, finden sie ausreichend Nahrung an kotfressenden Käfern. Sie nutzt das Massenauftreten von Maikäfern in Laubwäldern bei kühler Witterung für die Jagd. Ihr Flug ist eher langsam. Sie greifen ihre Beute oft dicht an der Vegetationsschicht auf, wie zum Beispiel Nachtfalter an Distelblüten.

Zum Überwintern suchen die Tiere gemeinschaftlich Höhlen und Bergwerkstollen mit einer Temperatur von über 7° C auf. Sie unternehmen zu den Winterquartieren aber keine größeren Wanderungen und sind ortstreu. Einzelne Tiere können aber auch bei niedrigeren Temperaturen Winterschlaf halten.

Seit den 1950ern nehmen die Bestände im nördlichen Verbreitungsraum dramatisch ab. In einigen Bereichen schwinden die Populationen sogar bis unter 1% ihrer ursprünglichen Größe. Als Hauptgrund wird die Verwendung von hochtoxischen Pestiziden (vorwiegend Lindan und DDT) in Land- und Forstwirtschaft angesehen. Verluste und Zerschneidung von Habitaten und die Reduzierung des Nahrungsangebotes stellen weiterhin eine Gefährdung der Art dar.